Topoisomerase I 來源于牛痘病毒（vaccinia virus）， 通過基因重組方案制備純化。其能解旋DNA的超螺旋結構， 除此外其能識別并切割雙鏈DNA末端 [5’C(T)CCTT↓]，并 且與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復合物。該共價復合物遇 到DNA的5’-OH基團后，重新連接形成完整DNA鏈。因此， 使用該酶可作為DNA連接的有效工具，可用于DNA的載體 連接（TOPO克隆載體制備）、接頭連接（NGS建庫）等實 驗。